Research Article

miR-25通过抑制大鼠ITGAV和PEDF介导视网膜变性

卷 17, 期 5, 2017

页: [359 - 374] 页: 16

弟呕挨: 10.2174/1566524018666171205122540

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摘要

背景:年龄相关性黄斑变性(AMD)是老年人不可逆失明的主要原因。视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)中的氧化应激被认为在AMD的发病机制中起着举足轻重的作用。 miR-25在几种细胞类型中作为响应氧化应激的基本调节剂起作用,但其在RPE细胞中的功能尚不清楚。 目的:探讨miR-25在RPE细胞中的作用及其在AMD发生发展中的作用。 方法:用碘酸钠(SI)诱导大鼠视网膜变性模型。进行视网膜下注射antagomiR-25进行干预,而争夺作为对照。用视网膜电图(ERG)记录视觉反应。进行TUNEL分析以检测细胞凋亡。进行体内吞噬体定量以评估RPE细胞功能。进行氧 - 葡萄糖剥夺治疗以模拟体外氧化应激。通过定量聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白质印迹分别进行mRNA水平和蛋白质水平的基因表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养液中色素上皮衍生因子(PEDF)水平。双荧光素酶检测法检测miR-25与整合素αV(IGTAV)/ PEDF 3''UTR之间的相互作用。进行染色质免疫沉淀(ChIP)测定以检查其miR-25的转录调控。 结果:氧化应激在RPE细胞的早期阶段上调了miR-25,伴随吞噬作用减弱,生长因子分泌减少。这种变化发生在经过处理的大鼠的RPE细胞凋亡和视力损害之前。此外,antagomiR-25干预有效地挽救了RPE细胞在这种模型中的退化。通过直接靶向IGTAV和PEDF证实增加的miR-25介导RPE变性。另一方面,在上游,在体内和体外模型中,发现miR-25在氧化应激下被STAT3信号传导上调。 结论:我们的研究结果表明,在SI治疗的大鼠中,氧化应激在非常早的阶段激活上调miR-25表达的STAT3信号传导。然后增加的miR-25抑制ITGAV和PEDF表达,导致RPE吞噬功能障碍,然后发生在AMD患者中观察到的RPE凋亡和视觉障碍。这些发现使我们更好地了解AMD的发病机制,并提示miR-25可能是氧化应激相关RPE疾病(如AMD)的潜在治疗靶点。

关键词: 视网膜变性,miR-25,氧化应激,RPE细胞,ITGAV,PEDF,STAT3。


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