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当代阿耳茨海默病研究

Editor-in-Chief

ISSN (Print): 1567-2050
ISSN (Online): 1875-5828

Research Article

五种市售Aβ42肽的体外聚集能力研究

卷 18, 期 9, 2021

页: [701 - 710] 页: 10

弟呕挨: 10.2174/1567205018666211124105844

价格: $65

摘要

背景:不同厂家生产的人工合成人淀粉样蛋白-β (1-42) (Aβ42)肽作为最基本的合成材料已得到广泛应用。它们的聚集能力对Aβ42生理病理研究的可靠性、重复性和可比性至关重要。然而,它还没有被评估和比较。 目的:分析5种市售Aβ42肽聚合能力的一致性。 方法:用HFIP预处理以A、B、C、D、E为代表的5 Aβ42肽。将预处理后的Aβ42肽溶解在硫黄素T (ThT)溶液中,通过聚合动力学试验监测其30 h的聚合动力学。同时,预处理后的肽在磷酸盐缓冲盐水中聚集。聚合12 h后,分别采用ThT荧光、远紫外圆二色(CD)、SDS-PAGE、western blot和透射电镜(TEM)等方法进行检测。聚集8 h和12 h后,使用Cell Counting Kit-8进一步评价其对SH-SY5Y细胞的细胞毒性。 结果:在聚集动力学中,肽A、C、E呈低水平曲线,肽B、D呈典型的s型动力学曲线。在CD测定中,肽B和D的聚集物呈现较高的CD负峰,高度分别为-8.09 mdeg和-14.37 mdeg,而肽A、C和E的高度分别为-1.04、-3.55和-3.88。ThT检测中,B肽和D肽聚集体的相对荧光强度分别为7.79和8.82,高于A肽、C肽和E肽的1.19、1.71和2.70。在SDS-PAGE中,所有聚集体包含单体和11个聚合物。此外,肽B-E从二聚体到三聚体呈梯形分布,肽a聚集到二聚体。通过western blot检测,单体的条带仍然存在于所有的聚集体中。此外,肽B和D呈二聚体和三聚体,肽A和C只呈二聚体,肽E呈强三聚体。透射电镜下,仅在肽B中可以观察到原纤维,而在其他肽中则形成大量的球状聚集物。此外,肽B、D和E在聚集8 h后具有较高的细胞毒性,而肽A、B和D在聚集12 h后具有较高的细胞毒性。 结论:市售Aβ42肽在聚集能力上存在明显差异,应引起Aβ42相关基础研究领域的足够重视。不同测定方法对聚集能力的评价存在一定的差异,建立合理、统一的测定策略已迫在眉睫。

关键词: 阿尔茨海默病,Aβ42,聚集,细胞毒性,测量,差异。


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