摘要
目的:为了更有效地产生诱导性多能干细胞(iPSC),至关重要的是要确定易于进入且可能需要较少因子转化为iPSC的体细胞。 方法:用含有3种转录因子(OCT-4,KLF-4和c-MYC,3F)或4种转录因子(OCT-4,KLF-4,c-MYC和SOX-2)的慢病毒载体转导人表皮黑素细胞, 4F)。一旦克隆形成,就进行与干细胞多能性有关的测定,包括碱性磷酸酶染色,DNA甲基化水平,干细胞标志物的表达和超微结构分析。然后诱导获得的iPSCs在体外分化为代表三个胚胎层的细胞。 结果:在用3F或4F转导表皮黑素细胞后的7天,形成了碱性磷酸酶染色呈阳性的克隆。用针对OCT-4和SOX-2的抗体进行的荧光染色呈强阳性,并且细胞显示出高的细胞核质比和活跃的核运动。通过超微结构分析在细胞质中未发现黑素体。克隆细胞与其亲代细胞之间的DNA甲基化水平存在明显差异。但是,在3F或4F转染的克隆细胞之间没有显着差异。同时,iPSCs在体外成功分化为三个胚层细胞。 结论:人类表皮黑素细胞不需要异位SOX-2表达即可转化为iPSC,并且可以作为获得具有较少遗传成分的患者特异性iPSC的替代来源。
关键词: 表皮,黑素细胞,多能,重编程,iPSCS,转录。
图形摘要
[http://dx.doi.org/10.1007/978-1-62703-348-0_3] [PMID: 23546745]
[http://dx.doi.org/10.1016/j.jid.2017.07.849] [PMID: 28887108]
[http://dx.doi.org/10.2174/1574888X12666170927115317] [PMID: 28969537]
[http://dx.doi.org/10.1002/JPER.18-0033] [PMID: 30039603]
[http://dx.doi.org/10.1016/j.stemcr.2018.12.018] [PMID: 30713040]
[http://dx.doi.org/10.1016/j.bbrc.2019.09.120] [PMID: 31582220]
[http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0168451] [PMID: 27992514]
[http://dx.doi.org/10.1242/jcs.054783] [PMID: 19723802]
[http://dx.doi.org/10.1016/j.jphotobiol.2015.06.009] [PMID: 26114219]
[PMID: 7504884]
[http://dx.doi.org/10.1155/2014/768391] [PMID: 25431601]
[http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2014.07.003] [PMID: 25192464]
[http://dx.doi.org/10.1093/eurheartj/ehs203] [PMID: 22798560]
[http://dx.doi.org/10.1089/cell.2015.0085] [PMID: 27055628]
[http://dx.doi.org/10.3389/fnsyn.2016.00028] [PMID: 27601992]
[http://dx.doi.org/10.5966/sctm.2014-0024] [PMID: 25355730]
[http://dx.doi.org/10.32607/20758251-2014-6-1-45-53] [PMID: 24772326]
[http://dx.doi.org/10.1111/ddg.12403] [PMID: 25087921]
[http://dx.doi.org/10.3389/fcell.2016.00152] [PMID: 28154814]
[http://dx.doi.org/10.1186/s13287-018-0947-5] [PMID: 30053890]
[http://dx.doi.org/10.1111/j.1600-0625.2011.01282.x] [PMID: 21585557]
[http://dx.doi.org/10.1016/j.ejcb.2013.11.006] [PMID: 24365127]
[http://dx.doi.org/10.1016/j.stem.2008.08.003] [PMID: 18786420]
[http://dx.doi.org/10.3727/215517915X689038] [PMID: 26858904]
[http://dx.doi.org/10.1634/stemcells.2008-0317] [PMID: 18635867]
[http://dx.doi.org/10.1007/s00018-013-1482-2] [PMID: 24114325]
[http://dx.doi.org/10.1089/ars.2011.4375] [PMID: 22044221]
[http://dx.doi.org/10.1038/srep25046] [PMID: 27141993]